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泓迅生物利用CRISPR-Cas9技術編輯酵母菌中的一個920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相關基因,如果ADE1失活,則細胞將會積累紅色色素,呈現(xiàn)紅色菌落。
陽性克隆菌落
測序結果顯示,轉化子的ADE1基因缺失了18個堿基,被成功編輯。
圖1 mScarlet基因敲入后克隆子的PCR鑒定電泳圖
圖3 熒光顯微鏡下大腸桿菌NC101突變株細胞圖像。(a)白光下細胞圖片,(b)594 nm光源激發(fā)后細胞圖片。
特異性較強,不同微生物物種之間差異較大,需要個性化改造載體。此外,基因組基因編輯篩選較容易,若是質(zhì)粒上的基因編輯,除非提高編輯效率,不然后續(xù)的篩選比較困難。